Elektroforesis Gel Poliakrilamida
Elektroforesis gel ialah teknik asas dalam makmal merentasi disiplin biologi, membenarkan pemisahan makromolekul seperti DNA, RNA dan protein. Media dan mekanisme pemisahan yang berbeza membolehkan subset molekul ini diasingkan dengan lebih berkesan dengan mengeksploitasi ciri fizikalnya. Untuk protein khususnya, elektroforesis gel poliakrilamida (PAGE) selalunya merupakan teknik pilihan.
PAGE ialah teknik yang mengasingkan makromolekul seperti protein berdasarkan mobiliti elektroforesisnya, iaitu keupayaan analit untuk bergerak ke arah elektrod cas yang bertentangan. Dalam PAGE, ini ditentukan oleh cas, saiz (berat molekul) dan bentuk molekul. Analit bergerak melalui liang yang terbentuk dalam gel poliakrilamida. Tidak seperti DNA dan RNA, protein berbeza bertanggungjawab mengikut asid amino yang digabungkan, yang boleh mempengaruhi cara ia berjalan. Rentetan asid amino juga boleh membentuk struktur sekunder yang memberi kesan kepada saiz ketaranya dan seterusnya bagaimana ia boleh bergerak melalui liang-liang. Oleh itu, kadangkala mungkin wajar untuk menyahtukarkan protein sebelum elektroforesis untuk menglinearkannya jika anggaran saiz yang lebih tepat diperlukan.
HALAMAN SDS
Elektroforesis gel poliakrilamida natrium-dodesil sulfat ialah teknik yang digunakan untuk memisahkan molekul protein berjisim 5 hingga 250 kDa. Protein dipisahkan semata-mata berdasarkan berat molekulnya. Sodium dodecyl sulfate, surfaktan anionik, ditambah dalam penyediaan gel yang menutupi cas intrinsik sampel protein dan memberikan nisbah cas kepada jisim yang serupa. Dengan kata mudah, ia menyahtukarkan protein dan memberikannya cas negatif.
HALAMAN Asli
Native PAGE ialah teknik yang menggunakan gel tidak denaturasi untuk pengasingan protein. Tidak seperti SDS PAGE, tiada agen pendenatur ditambah dalam penyediaan gel. Akibatnya, pemisahan protein berlaku berdasarkan cas dan saiz protein. Dalam teknik ini, konformasi, lipatan dan rantai asid amino protein adalah faktor yang bergantung kepada pemisahan. Protein tidak rosak dalam proses ini, dan boleh dipulihkan selepas selesai pemisahan.
Bagaimanakah elektroforesis gel poliakrilamida (PAGE) berfungsi?
Prinsip asas PAGE adalah untuk memisahkan analit dengan menghantarnya melalui liang gel poliakrilamida menggunakan arus elektrik. Untuk mencapai matlamat ini, campuran akrilamida–bisakrilamida dipolimerkan (polyacrylamide) dengan penambahan ammonium persulfate (APS). Tindak balas, yang dimangkinkan oleh tetramethylethylenediamine (TEMED), membentuk struktur seperti jaring dengan liang di mana analit boleh bergerak (Rajah 2). Semakin tinggi peratusan jumlah akrilamida yang dimasukkan ke dalam gel, semakin kecil saiz liang, maka semakin kecil protein yang akan dapat melaluinya. Nisbah akrilamida kepada bisakrilamida juga akan memberi kesan kepada saiz liang tetapi ini selalunya dikekalkan. Saiz liang yang lebih kecil juga mengurangkan kelajuan di mana protein kecil dapat bergerak melalui gel, meningkatkan resolusi mereka dan menghalangnya daripada lari ke dalam penimbal dengan cepat apabila arus digunakan.
Peralatan untuk Elektroforesis Gel Poliakrilamida
Sel Elektroforesis Gel (Tangki/Ruang)
Tangki gel untuk elektroforesis gel poliakrilamida (PAGE) adalah berbeza daripada tangki gel agarose. Tangki gel agarose adalah mendatar, manakala tangki PAGE adalah menegak. Dengan sel elektroforesis menegak (tangki/ruang), gel nipis (biasanya 1.0mm atau 1.5mm) dituangkan di antara dua plat kaca dan dipasang supaya bahagian bawah gel terendam dalam penampan dalam satu ruang dan bahagian atas terendam dalam penimbal dalam bilik lain. Apabila arus digunakan, sejumlah kecil penimbal berhijrah melalui gel dari ruang atas ke ruang bawah. Dengan pengapit yang kuat untuk menjamin pemasangan kekal dalam kedudukan tegak, peralatan memudahkan gel berjalan pantas dengan penyejukan yang sekata menghasilkan jalur yang berbeza.
Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) mengeluarkan pelbagai saiz sel elektroforesis gel poliakrilamida (tangki/ruang). Model DYCZ-20C dan DYCZ-20G ialah sel elektroforesis menegak (tangki/ruang) untuk analisis penjujukan DNA. Beberapa sel elektroforesis menegak (tangki/ruang) serasi dengan sistem blotting, seperti model DYCZ-24DN, DYCZ-25D dan DYCZ-25E serasi dengan model sistem Western Blotting DYCZ-40D, DYCZ-40G dan DYCZ-40F, yang digunakan untuk memindahkan molekul protein dari gel ke membran. Selepas elektroforesis SDS-PAGE, Western Blotting ialah teknik untuk mengesan protein tertentu dalam campuran protein. Anda boleh memilih sistem blotting ini mengikut keperluan percubaan.
Bekalan Kuasa Elektroforesis
Untuk menyediakan tenaga elektrik untuk menjalankan gel, anda memerlukan bekalan kuasa elektroforesis. Di Liuyi Biotechnology kami menyediakan rangkaian bekalan kuasa elektroforesis untuk semua aplikasi. Model DYY-12 dan DYY-12C dengan voltan dan arus stabil tinggi boleh memenuhi elektroforesis keperluan voltan tinggi. Ia mempunyai fungsi pendirian, pemasaan, VH dan aplikasi langkah demi langkah. Ia sesuai untuk aplikasi elektroforesis penjujukan IEF dan DNA. Untuk aplikasi elektroforesis protein dan DNA am, kami mempunyai model DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, dan sebagainya, yang juga merupakan bekalan kuasa jualan panas dengan sel elektroforesis (tangki/ruang). Ini boleh digunakan untuk aplikasi elektroforesis voltan tengah dan rendah, seperti untuk kegunaan makmal sekolah, makmal hospital dan sebagainya. Lebih banyak model untuk bekalan kuasa, sila lawati tapak web kami.
Jenama Liuyi mempunyai sejarah lebih 50 tahun di China dan syarikat itu boleh menyediakan produk yang stabil dan berkualiti tinggi di seluruh dunia. Melalui pembangunan bertahun-tahun, ia adalah layak untuk pilihan anda!
Untuk maklumat lanjut tentang kami, sila hubungi kami melalui e-mel[e-mel dilindungi] or [e-mel dilindungi].
Rujukan untuk Apakah elektroforesis gel poliakrilamida?
1. Karen Steward PhD Elektroforesis gel poliakrilamida, Cara Ia Berfungsi, Varian Teknik dan Aplikasinya
Masa siaran: Mei-23-2022