Kami telah berkongsi beberapa pertimbangan minggu lepas untuk menggunakan elektroforesis membran selulosa asetat, dan kami akan menyelesaikan topik ini di sini hari ini untuk rujukan anda.
Pemilihan daripada Kepekatan Penampan
Kepekatan penimbal yang digunakan dalam elektroforesis membran selulosa asetat biasanya lebih rendah daripada yang digunakan dalam elektroforesis kertas. pH 8.6 yang biasa digunakanBpenimbal arbital biasanya dipilih dalam julat 0.05 mol/L hingga 0.09 mol/L. Apabila memilih kepekatan, penentuan awal dibuat. Sebagai contoh, jika panjang jalur membran antara elektrod dalam ruang elektroforesis ialah 8-10cm, voltan 25V diperlukan setiap sentimeter panjang membran, dan keamatan arus hendaklah 0.4-0.5 mA setiap sentimeter lebar membran. Jika nilai ini tidak dicapai atau melebihi semasa elektroforesis, kepekatan penimbal hendaklah ditingkatkan atau dicairkan.
Kepekatan penimbal yang terlalu rendah akan mengakibatkan pergerakan pantas jalur dan peningkatan lebar jalur. Sebaliknya, kepekatan penimbal yang terlalu tinggi akan melambatkan penghijrahan jalur, menjadikannya sukar untuk membezakan jalur pemisahan tertentu.
Perlu diingatkan bahawa dalam elektroforesis membran selulosa asetat, sebahagian besar arus dijalankan melalui sampel, yang menghasilkan sejumlah besar haba. Kadangkala, kepekatan penimbal yang dipilih mungkin dianggap sesuai. Walau bagaimanapun, di bawah keadaan suhu persekitaran yang meningkat atau apabila menggunakan voltan yang lebih tinggi, penyejatan air akibat haba boleh bertambah kuat, mengakibatkan kepekatan penimbal yang terlalu tinggi malah menyebabkan membran menjadi kering.
Jumlah Sampel
Dalam elektroforesis membran selulosa asetat, jumlah isipadu sampel ditentukan oleh pelbagai faktor, termasuk keadaan elektroforesis, sifat sampel itu sendiri, kaedah pewarnaan, dan teknik pengesanan. Sebagai prinsip umum, lebih sensitif kaedah pengesanan, lebih kecil jumlah sampel boleh, yang berfaedah untuk pengasingan. Jika jumlah sampel berlebihan, corak pemisahan elektroforesis mungkin tidak jelas, dan pewarnaan juga boleh memakan masa. Walau bagaimanapun, apabila menganalisis secara kuantitatif jalur bernoda yang dipisahkan menggunakan kaedah pengesanan kolorimetrik elusi, volum sampel tidak boleh terlalu kecil, kerana ia boleh mengakibatkan nilai penyerapan yang lebih rendah untuk komponen tertentu, yang membawa kepada ralat yang lebih tinggi dalam mengira kandungannya. Dalam kes sedemikian, volum sampel hendaklah ditingkatkan dengan sewajarnya.
Biasanya, volum sampel yang ditambah pada setiap sentimeter baris aplikasi sampel berjulat dari 0.1 hingga 5 μL, bersamaan dengan jumlah sampel 5 hingga 1000 μg. Sebagai contoh, dalam analisis elektroforesis protein serum rutin, jumlah sampel yang ditambah pada setiap sentimeter garisan aplikasi secara amnya tidak melebihi 1 μL, bersamaan dengan 60 hingga 80 μg protein. Walau bagaimanapun, apabila menganalisis lipoprotein atau glikoprotein menggunakan kaedah elektroforesis yang sama, isipadu sampel perlu ditambah dengan sepadan.
Kesimpulannya, volum sampel yang paling sesuai hendaklah dipilih berdasarkan keadaan tertentu melalui beberapa siri eksperimen awal.
Pemilihan Larutan Pewarnaan
Jalur yang dipisahkan dalam elektroforesis membran selulosa asetat biasanya diwarnakan sebelum dikesan. Komponen sampel yang berbeza memerlukan kaedah pewarnaan yang berbeza, dan kaedah pewarnaan yang sesuai untuk elektroforesis membran selulosa asetat mungkin tidak boleh digunakan sepenuhnya untuk kertas penapis.
Terdapat tiga prinsip utama untuk memilih penyelesaian pewarnaanmembran selulosa asetat. pertama,Pewarna larut air harus diutamakan berbanding pewarna larut alkohol untuk mengelakkan pengecutan dan ubah bentuk membran yang disebabkan oleh larutan pewarnaan yang terakhir. Selepas pewarnaan, adalah penting untuk membilas membran dengan air dan meminimumkan tempoh pewarnaan. Jika tidak, membran mungkin menjadi bergulung atau mengecut, yang akan menjejaskan pengesanan seterusnya.
Kedua, adalah lebih baik untuk memilih pewarna dengan pertalian pewarnaan yang kuat untuk sampel. Dalam elektroforesis membran selulosa asetat protein serum, amino black 10B biasanya digunakan kerana pertalian pewarnaannya yang kuat untuk pelbagai komponen protein serum dan kestabilannya.
Ketiga, pewarna berkualiti yang boleh dipercayai harus dipilih. Sesetengah pewarna, walaupun mempunyai nama yang sama, mungkin mengandungi kekotoran yang mengakibatkan latar belakang gelap terutamanya selepas pewarnaan. Ini malah boleh mengaburkan jalur asal yang dipisahkan dengan baik, menjadikannya sukar untuk dibezakan.
Akhir sekali, pilihan kepekatan larutan pewarnaan adalah penting. Secara teorinya, nampaknya kepekatan larutan pewarnaan yang lebih tinggi akan membawa kepada pewarnaan komponen sampel yang lebih teliti dan hasil pewarnaan yang lebih baik. Walau bagaimanapun, ini tidak berlaku. Perkaitan pengikatan antara komponen sampel dan pewarna mempunyai had tertentu, yang tidak meningkat dengan peningkatan kepekatan larutan pewarnaan. Sebaliknya, kepekatan larutan pewarnaan yang terlalu tinggi bukan sahaja membazirkan pewarna tetapi juga menyukarkan untuk mencapai latar belakang yang jelas. Lebih-lebih lagi, apabila keamatan warna mencapai nilai maksimum tertentu, lengkung penyerapan pewarna tidak mengikut hubungan linear, terutamanya dalam pengukuran kuantitatif. Dalam elektroforesis membran selulosa asetat, kepekatan larutan pewarnaan biasanya lebih rendah daripada yang digunakan dalam elektroforesis kertas.
Butiran untuk mengetahui tentang Bioteknologi Beijing Liuyi's membran selulosa asetattangki elektroforesis dan aplikasi elektroforesisnya, sila lawati di sini:
lEksperimen untuk mengasingkan protein serum oleh Membran Selulosa Asetat
lElektroforesis Membran Selulosa Asetat
lBeberapa Pertimbangan Perlu Diingati Apabila Menggunakan Elektroforesis Membran Selulosa Asetat (1)
Jika anda mempunyai sebarang pelan pembelian untuk produk kami, sila jangan teragak-agak untuk menghubungi kami. Anda boleh menghantar mesej kepada kami melalui e-mel[e-mel dilindungi]atau[e-mel dilindungi], atau sila hubungi kami di +86 15810650221 atau tambah Whatsapp +86 15810650221, atau Wechat: 15810650221.
Rujukan:Elektroforesis(edisi kedua) oleh Encik Li
Masa siaran: Jun-06-2023