Prinsip Eksperimen
Elektroforesis Hemoglobin bertujuan untuk mengesan dan mengesahkan pelbagai hemoglobin normal dan abnormal.
Disebabkan oleh caj yang berbeza dan titik isoelektrik jenis hemoglobin yang berbeza, dalam larutan penimbal pH tertentu, apabila titik isoelektrik hemoglobin lebih rendah daripada pH larutan penimbal, hemoglobin membawa cas negatif dan berhijrah ke arah anod semasa elektroforesis. Sebaliknya, hemoglobin dengan cas positif bergerak ke arah katod.
Di bawah voltan tertentu dan selepas masa elektroforesis tertentu, hemoglobin dengan cas dan berat molekul yang berbeza mempamerkan arah dan kelajuan penghijrahan yang berbeza. Ini membolehkan pemisahan zon yang berbeza, dan analisis pengimbasan kolorimetrik atau elektroforetik seterusnya boleh dilakukan pada zon ini untuk mengukur pelbagai hemoglobin. Kaedah yang paling biasa digunakan ialah elektroforesis membran selulosa asetat pH 8.6.
Di dalam sitoplasma, kumpulan etilena glikol (CHOH-CHOH) terdapat dalam bahan glikogen atau polisakarida (seperti mukopolisakarida, mukoprotein, glikoprotein, glikolipid, dll.) dioksidakan oleh asid berkala dan ditukar kepada kumpulan aldehid (CHO-CHO). Kumpulan aldehid ini bergabung dengan reagen Schiff merah keunguan yang tidak berwarna, membentuk pewarna ungu-merah yang memendap di mana polisakarida terdapat di dalam sel. Tindak balas ini dikenali sebagai pewarnaan asid-Schiff (PAS), dahulunya dirujuk sebagai pewarnaan glikogen.
Kaedah Eksperimen
Bahan:Selulosa asetatmembrane, radas elektroforesis(DYCP-38C dan bekalan kuasa DYY-6C ), Alat Pemuatan Contoh Unggul(pipet), spektrofotometer, kuvet kolorimetrik, penampan.
Penampan:
(1) Penampan pH 8.6 TEB: Timbang 10.29 g Tris, 0.6 g EDTA, 3.2 g asid borik, dan tambah air suling kepada 1000 ml.
(2) Penampan Borat: Timbang 6.87 g boraks dan 5.56 g asid borik, dan tambah air suling kepada 1000 ml.
Prosedur:
Ppembaikan Penyelesaian Hemoglobin
Ambil 3 ml darah yang mengandungi heparin atau natrium sitrat sebagai antikoagulan. Empar pada 2000 rpm selama 10 minit dan buang plasma. Basuh sel darah merah tiga kali dengan garam fisiologi (750 rpm, 5 minit sentrifugasi setiap kali). Empar pada 2200 rpm selama 10 minit dan buang supernatan. Tambah jumlah air suling yang sama, kemudian tambah 0.5 kali jumlah karbon tetraklorida. Goncang kuat-kuat selama 5 minit, dan kemudian sentrifuge pada 2200 rpm selama 10 minit untuk mengumpul larutan Hb atas untuk kegunaan kemudian.
Merendam Membran
Potong membran selulosa asetat kepada jalur berukuran 3 cm × 8 cm. Rendamkannya dalam penimbal pH 8.6 TEB sehingga tepu sepenuhnya, kemudian keluarkan dan lap kering dengan kertas turas.
Mengesan
Gunakan pipet untuk mengesan 10 μl larutan hemoglobin secara menegak pada membran selulosa asetat (sebelah kasar), kira-kira 1.5 cm dari tepi.
Elektroforesis
Tuangkan larutan penimbal borat ke dalam ruang elektroforesis. Letakkan membran selulosa asetat dengan bahagian bertompok di hujung katod ruang. Jalankan pada 200 V selama 30 minit.
Elusi
Potong zon HbA dan HbA2, letakkannya dalam tabung uji yang berasingan, dan tambah 15 ml dan 3 ml air suling, masing-masing. Goncang perlahan-lahan untuk mencairkan hemoglobin sepenuhnya, kemudian campurkan.
Kolorimetri
Sifarkan penyerapan menggunakan air suling untuk larutan elusi dan ukur penyerapan pada 415 nm.
Pengiraan
HbA2(%) = Penyerapan tiub HbA2 / (Serapan tiub HbA × 5 + Penyerapan tiub HbA2) × 100%
Pengiraan Keputusan Eksperimen
Julat Rujukan untuk pH 8.6 TEB Penampan Selulosa Asetat Elektroforesis: HbA > 95%, HbA2 1%-3.1%
Nota
Masa elektroforesis tidak boleh terlalu lama. Membran selulosa asetat tidak boleh kering semasa elektroforesis. Hentikan elektroforesis apabila HbA dan HbA2 dipisahkan dengan jelas. Elektroforesis yang berpanjangan boleh menyebabkan penyebaran jalur dan kabur.
Elakkan menggunakan terlalu banyak sampel. Cecair hemoglobin yang berlebihan boleh menyebabkan detasmen jalur atau pewarnaan yang tidak mencukupi, mengakibatkan paras HbA meningkat secara palsu.
Mencegah pencemaran membran selulosa asetat dengan protein.
Arus tidak boleh terlalu tinggi; jika tidak, jalur hemoglobin mungkin tidak terpisah.
Sentiasa masukkan spesimen daripada individu normal dan hemoglobin abnormal yang perlu diketahui sebagai kawalan.
Beijing Liuyi Bioteknologi mengeluarkan tangki elektroforesis profesional untuk elektroforesis hemoglobin yang merupakan modelDYCP-38Ctangki elektroforesis membran selulosa asetat, dan terdapat dua model bekalan kuasa elektroforesis tersedia untuk tangki elektroforesis membran selulosa asetatDYY-2CdanDYY-6Cbekalan kuasa.
Sementara itu, Beijing Liuyi Bioteknologi menyediakan membran selulosa asetat untuk pelanggan, dan saiz membran selulosa asetat boleh disesuaikan. Selamat datang untuk meminta kami untuk sampel dan maklumat lanjut.
Jenama Beijing Liuyi mempunyai sejarah lebih daripada 50 tahun di China dan syarikat itu boleh menyediakan produk yang stabil dan berkualiti tinggi di seluruh dunia. Melalui pembangunan bertahun-tahun, ia layak untuk pilihan anda!
Kami kini sedang mencari rakan kongsi, kedua-dua tangki elektroforesis OEM dan pengedar dialu-alukan.
Jika anda mempunyai sebarang pelan pembelian untuk produk kami, sila jangan teragak-agak untuk menghubungi kami. Anda boleh menghantar mesej kepada kami melalui e-mel[e-mel dilindungi]atau[e-mel dilindungi], atau sila hubungi kami di +86 15810650221 atau tambah Whatsapp +86 15810650221, atau Wechat: 15810650221
Masa siaran: Sep-20-2023