Prinsip
Elektroforesis filem selulosa asetat ialah kaedah elektroforesis menggunakan filem selulosa asetat sebagai sokongan. Fenomena di mana zarah bercas bergerak ke arah elektrod bertentangan di bawah tindakan medan elektrik dipanggil elektroforesis. Oleh kerana setiap protein mempunyai titik isoelektrik tertentu, jika protein diletakkan dalam larutan dengan pH lebih rendah daripada titik isoelektriknya, protein akan bercas positif dan bergerak ke arah elektrod negatif. Sebaliknya, ia bergerak ke kutub positif. Oleh kerana kelajuan molekul protein yang bergerak dalam medan elektrik berkaitan dengan casnya, bentuk dan saiz molekul, protein yang berbeza boleh dipisahkan oleh elektroforesis. Serum mengandungi pelbagai protein, semuanya mempunyai titik isoelektrik pada pH7.5 atau kurang. Apabila serum diletakkan dalam penimbal pH 8.6 untuk menjalankan elektroforesis, semua protein serum bercas negatif dan akan bergerak ke arah sisi positif dalam medan elektrik. Oleh kerana pelbagai protein serum mempunyai cas yang berbeza pada pH yang sama, zarah molekul berbeza dalam saiz, dan oleh itu kelajuan penghijrahan adalah berbeza, dan ia dipisahkan oleh elektroforesis. Titik isoelektrik dan berat molekul protein serum ditunjukkan dalam jadual di bawah:
| Protein | Titik isoelektrik(PI) | Berat molekul |
| Albumin | 4.88 | 69 000 |
| α1-gloulin | 5.00 | 200 000 |
| α2-gloulin | 5.06 | 300 000 |
| β-gloulin | 5.12 | 9 000~150 000 |
| γ-gloulin | 6.85~7.50 | 156 000~ 300 000 |
Percubaan adalah untuk memisahkan protein yang berbeza dalam serum darah dengan membran selulosa asetat (abbr. CAM) sebagai media sokongan. CAM adalah sejenis loos berbuihefilem dengan seragam yang baik, dan ketebalan adalah 0.1mm-1.5mm, yang mempunyai penyerapan air tertentu.
Bahan, instrumen dan reagen untuk CAM Electrophoresis
Sampel:serum darah manusia yang sihat
Instrumen:bekalan kuasa DYY-6C, tangki elektroforesis DYCP-38C, pemuatan sampel unggul WD-9404
Reagen
1) membran selulosa asetat 7X9cm
2) PH 8.6 larutan penampan barbitol (kekuatan ionik 0.05-0.09, masa 0.06tid.): ambil 1,84g asid barbiturik Dietil, dan kemudian ambil 1.03g Dietil natrium pentobarbital, tambahkan sedikit air suling untuk dipanaskan untuk larut, dan buat sehingga 1000ml;
3) Noda: Ponceau S 0.2g, Trichloroacetic 3g, tambah 100ml air suling;
4) TBS/T atau PBS/T: 45ml 95% etanol, 5ml asid asetik glasier, tambah 50ml air suling;
5) Penyelesaian Pembersihan: 70ml etanol kontang, 30ml asid asetik glasier.
Kaedah Eksperimend
1) Sediakan membran: Rendam membran ke dalam larutan penimbal barbitol 30min-8j, dan keluarkannya, keluarkan larutan tambahan dengan kertas penyerap.
2) Memuatkan sampel: Bezakan bahagian kasar dan bahagian licin membran, dan tandakan garisan pada jarak 1.5cm ke hujung atas pada bahagian kasar. Muatkan sampel dengan alat pemuatan sampel yang unggul pada bahagian kasar. Nota: Sampel hendaklah dimuatkan pada bahagian membran yang kasar. Selepas sampel serum menembusi sepenuhnya ke dalam membran, balikkan membran, letakkan bahagian kasar (dengan sampel) menghadap ke bawah ke tangki, dan hujung dengan sampel diletakkan dalam elektrod negatif.
3) Elektroforesis: Hidupkan bekalan kuasa, 0.4～Membran 0.6m A/cm, masa berjalan ialah 30-45 min. Selepas menjalankan elektroforesis, matikan kuasa.
4) Noda dan bersihkan: Keluarkan membran dari tangki, dan rendamit ke dalam larutan pewarna selama 5 minit, dan kemudian bersihkannya dalam larutan pembersih berulang kali selama 3-4 kali sehingga warna latar belakang jelas. Protein serum harus ditunjukkan pada jalur, dan biasanya terdapat lima zon, membentuk hujung atas kepada garis yang ditanda, Albumin, α1-gloulin, α2-gloulin, β-gloulin, γ-gloulin.
5) Pemeliharaan: meletakkan electrtophoresis keringpancaragamdalam larutan pembersih selama 10-15 minit, dan kemudian keluarkan dan lekatkannya pada kaca bersih, selepas ia kering, ia akan menjadi filem teluspancaragam.
EksperimenHasilnya
Kesan pemisahan sampel serum adalah baik, dan tiada fenomena band tailing. Kebolehulangan keputusan berbeza-beza disebabkan oleh prosedur ujian dan kaedah penguji, dan kebolehulangan adalah tinggi.
Kesimpulan
Sistem pengesanan elektroforesis klinikal pantas (Tangki elektroforesisDYCP-38C,bekalan kuasaDYY-6C dan pemuatan sampel unggul WD-9404) yang dihasilkan oleh kamisyarikat Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdmemenuhi keperluan eksperimen,danhasilnya boleh dihasilkan semula, mudah dan cepat, sesuai untukpengajaranpenyelidikan.
Beijing LiuyiBiotechnology Co., Ltd mengkhusus dalam pembuatan produk elektroforesis untuk industri sains hayat, yangmempunyai lebih daripada 50 tahun sejarah di China dan syarikat itu boleh menyediakan produk yang stabil dan berkualiti tinggi di seluruh dunia. Melalui pembangunan bertahun-tahun, ia layak untuk pilihan anda!
Kami kini sedang mencari rakan kongsi, kedua-dua tangki elektroforesis OEM dan pengedar dialu-alukan.
Untuk maklumat lanjut tentang kami, sila hubungi kami melalui e-mel[e-mel dilindungi]atau[e-mel dilindungi].
Masa siaran: Nov-14-2022